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ELISA试剂盒实验常用规则和通用步骤是什么?

点击次数:447 发布时间:2018-03-28
 

ELISA试剂盒是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。它是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。以下是对ELISA实验的通用步骤的简单说明。
ELISA试剂盒实验通用步骤:
(1)、要保证移液枪的精确性,偏差不能超过2%。可用水和电子天平进行判定。如果有专业人员进行纠正更好。
(2)、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。提取不一样的液体后,要更换枪头。即使是提取标准品时也一样。
要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使效果更安稳。
(3)、实验时,要使底物避光储存。
(4)、用枪提取液体时速度不能太快,避免生成气泡而使提取量不精确。
(5)、提取液体时,要用量程和需要量相近的枪去吸,减小偏差数值。
(6)、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
(7)、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻摇晃30秒,是液体缓和均匀。也可以用酶标仪的晃动功用。
(8)、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,避免水分的蒸发。
(9)、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加彻底。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
(10)、洗液不够时,可用蒸馏水自行制作PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长时间保存。
(11)、底物是光敏感的,需要在临用前现配。
(12)、检测前,要翻开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
(13)、底物有一定的毒性,中止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
(14)、待检样品要澄清,否则会影响效果的精确性。
(15)、温浴时间应遵循试剂盒规定。
(16)、应尽量做双孔实验,这样才华保证数据的精确性。
(17)、ELISA试剂盒对效果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

 

 

 
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